新手大肠和菌落总数实验求解，我的过程不知道对不对

hycongyuan

才去质监站学习了几天今天自己做下，我做的是水的大肠和菌落总数，检测出来总觉得不对，求大神解答，附简单过程。
一、大肠（梯度取1:1 1:10）
1.取4.16GVRBA加100ML蒸馏水摇匀加热沸腾，冷却至50C°左右。
2.去样品水1ML加入培养皿加入VRBA
3.取样水1ML加9ML生理盐水摇匀取1ML到培养皿加入VRBA
待凝固后放入恒温箱36C°+-1C°培养18-24小时
二、菌总数
1.取PCA2.35G加入100ML蒸馏水摇匀经过121C°，15分钟灭菌。
2.取样水1ML加入培养皿倒入适量PCA
3..取样水1ML加9ML生理盐水摇匀取1ML到培养皿加入PCA
4.待凝固后放入恒温箱36C°+-1C°培养48小时左右。




我培养出来的菌总数可能是培养基倒少了，一个菌都没看到
大肠也没有。
有没大神给指导下

hycongyuan

还做了一个梯度的生理盐水也没长菌，

余珍珍

实验结束的时候紫外线灭菌把平板一起灭菌了？？？
做实验的时候太靠近火源了？？？
平板没倒过来培养？？？

hycongyuan

余珍珍 发表于 2016-8-31 09:38
实验结束的时候紫外线灭菌把平板一起灭菌了？？？
做实验的时候太靠近火源了？？？
平板没倒过来培养？？ ...

实验开始我就关闭紫外，做完也没开，
距离酒精灯也有10厘米左右哦。
平板倒过来了。
难道证明我这纯净水很纯洁么

chenthy_yu

你可以用自来水（没有灭菌的水）试试

hycongyuan

chenthy_yu 发表于 2016-8-31 09:57
你可以用自来水（没有灭菌的水）试试

我问了质监站老师，他说证明我水没问题，下午我在用自来水试一试看看，新手，总觉得哪里没做对。

woolni

chenthy_yu 发表于 2016-8-31 09:57
你可以用自来水（没有灭菌的水）试试

自来水不行，自来水几乎无菌，找点河水或污水吧

hycongyuan

woolni 发表于 2016-8-31 10:19
自来水不行，自来水几乎无菌，找点河水或污水吧

那换点河水看看48小时在看报告

woolni

长不出东西不可怕，还有哪些倒完的平板也别丢了，直接去用一个牙签找一个不干净的地方然后划一下，然后在无菌条件下在平板上划线，培养2天你就能看到细菌了，这个也可以反过来证明你的培养基没有问题，只是样瓶没有被污染无菌而已。

hycongyuan

woolni 发表于 2016-8-31 11:04
长不出东西不可怕，还有哪些倒完的平板也别丢了，直接去用一个牙签找一个不干净的地方然后划一下，然后在无 ...

我主要是新手，没检查出就感觉哪里不对，我还在找点有菌落和大肠的在做一次看看

angershine

不应该是先做好2个梯度的稀释以后再开始倒平板吗？

angershine

水没有细菌也不奇怪，看你用的什么方法灭菌的