微生物保藏方法之沙土管保藏法

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A.1　适用范围 本方法适用于产孢类放线菌、芽孢杆菌、曲霉属、青霉属以及少数酵母如隐球酵母和红酵母等。不适用于病原性真菌的保藏，特别是不适于以菌丝发育为主的真菌的保藏。
A.2　原理 干燥条件下微生物菌种代谢活动减缓，繁殖速度受到抑制。此方法可减少菌株突变，延长存活时间。
A.3　方法与步骤
A.3.1　沙土管制备 将河沙用60目过筛，弃去大颗粒及杂质，再用80目过筛，去掉细沙。用吸铁石吸去铁质，放入容器中用10%盐酸浸泡，如河沙中有机物较多可用20%盐酸浸泡。24小时后倒去盐酸，用水洗泡数次至中性，将沙子烘干或晒干。另取瘦红土100目过筛,水洗至中性，烘干，按沙∶土= 2∶1混合。把混匀的沙土分装入安瓿管或小试管中，高度为1厘米左右。塞好棉塞，0.1MPa灭菌30分钟，或常压间歇灭菌3次，每天每次1小时。灭菌后在不同部位抽出若干管，分别加营养肉汁、麦芽汁、豆芽汁等培养基，经培养检查后无微生物生长方可使用。
A.3.2　斜面培养物的制备 参照附录A。
A.3.3　制备菌悬液 向培养好的斜面培养物中注入3mL-5mL无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。用无菌吸管吸取菌悬液，均匀滴入沙土管中，每管0.2mL -0.5mL。放线菌和霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。
A.3.4　干燥 用真空泵抽去安瓿管中水分并放置于干燥器内。
A.3.5　纯培养检查 从做好的沙土管中，按10∶1比例抽查。无菌条件下用接种环取出少量沙土粒，接种于适宜的固体培养基上，培养后观察其生长情况和有无杂菌生长。如出现杂菌或菌落数很少，或根本不长，则须进一步抽样检查。
A.3.6　保藏 将纯培养检查合格的沙土管用火焰熔封管口。制好的沙土管存放于低温(4℃-15℃)干燥处，半年检查一次活力及杂菌情况。也可将纯培养检查合格的沙土管直接用牛皮纸或塑料纸包好，置干燥器内保存。用此方法保藏时间为2-10年不等。
A.3.7　复活 复活时在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次，也可取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。

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