面粉中芽孢总数测试方法（卡夫）

仲华

分享一个芽孢总数测试方法（卡夫），有需要的可以下来看看.

面粉中芽孢总数测试方法20090803

1.准备

1.1培养基及配置 (使用OXOID的)

平板计数琼脂（PCA）

胰蛋白胨       5.0g

酵母提取物    2.5g

葡萄糖        1.0g

琼脂           9.0 -15.0g*

pH值          7.0 ± 0.2

培养基的配置详见培养基说明书

1.2设备与材料

微生物实验室常规灭菌及培养设备

水浴锅80±1ºC；温度计（一定要校准过）；移液管

一次性培养平皿，直径：90mm； 恒温箱：36±1ºC

2.步骤

2.1取25克面粉样品（确保样品充分混匀）加入225ml灭菌生理盐水中，并进行充分均质形成混悬液,（在无菌均质杯内，8 000 r/min—10 000 r/min 均质1—2min, 或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1—2min制成1：10的样品匀液。）

2.2用10ml移液管转移10ml该混悬液（非上清液）至玻璃试管中，配置成1：10稀释度，充分振荡后再从此试管中取1ml加入装有9ml生理盐水稀释液的灭菌试管中，配置成1：100的稀释度，可根据实际配置相应的稀释度（比如-2，-3）。

2.3将所有的试管放置在80±1ºC的水浴中。一定要确保试管中的所有液体都浸没在水浴中。 试管中心温度在达到80±1ºC后保持10分钟。可以通过在水浴中放置一个加入10ml空白缓冲液的带有温度计的试管来监控样液温度的变化，此试管可以用铝箔封口，或使用有穿孔（便于温度计的插入）的试管塞。温度计测试点在缓冲液中段。

2.4 10分钟后，取出试管，迅速放至冷却（建议用16ºC水浴），冷却至20±1ºC备用。不要用冰水，没有16ºC水浴就用自来水冷却，冷却至室温即可。用自来水冷却时，可用大的水槽或容器。注意避免污染。

2.5 接种: 充分振荡后，分别从各稀释度样品均液中取1ml至一次性培养平皿中，注入已灭菌的平板计数琼脂（PCA）约15ml，并转动培养皿使培养基与稀释液充分的混合并均匀分布于内表面； 每个稀释度接种两个平板。

2.6 待琼脂凝固后，将培养皿倒放在36±1ºC的恒温箱中培养48±2小时。

2.7        24±2小时后可以预读， 48±2小时后取出进行读数，并记录。（读书方法和细菌总数相同。）

2.8        为了区别平板上的样品颗粒和菌落或便于读数如菌落数较多不易读数，可在读数前1-2小时每个平板注入1ml的1％TTC溶液（2,3,5- triphenyltetrazolium chloride 氯化三苯基四唑盐酸盐），覆盖住培养基表面，然后继续培养1-2小时读数。微生物的生长（比如细菌）会看起来是粉红色。

注意事项：控制好水浴加热的时间。

xyzrong

支持一下吧！貌似企业用的不多，先顶起，以方便有要用的筒子！

xilinxu

  特别之处：将所有的试管放置在80±1ºC的水浴中。一定要确保试管中的所有液体都浸没在水浴中。 试管中心温度在达到80±1ºC后保持10分钟。可以通过在水浴中放置一个加入10ml空白缓冲液的带有温度计的试管来监控样液温度的变化，此试管可以用铝箔封口，或使用有穿孔（便于温度计的插入）的试管塞。温度计测试点在缓冲液中段。

我们一般只处理第一个稀释度的样品，这里处理全部稀释度的样品，值得借鉴！！

仲华

xilinxu 发表于 2013-2-6 01:34
特别之处：将所有的试管放置在80±1ºC的水浴中。一定要确保试管中的所有液体都浸没在水浴中。 试管中 ...

说白了跟菌落总数 是差不多的
就是多了一个水浴过程
这个过程类似于巴氏灭菌一样。

这里要注意的中心温度要保持80正负1摄氏度10分钟。所以 要很快的让中心温度到达，但又不能超。呵呵

宋雨婷

我们做的时候也是只把第一个进行水浴处理的，支持楼主的做法，很严谨，，，，，，

仲华

宋雨婷 发表于 2013-2-6 08:43
我们做的时候也是只把第一个进行水浴处理的，支持楼主的做法，很严谨，，，，，，

但如果样品多了，中心温度还是相对难控制，

xlong87

好帖子 学习

QMSFMS

非常有用，学习了，呵呵

QMSFMS

投票支持仲华，人家资料好实在，呵呵，

仲华

QMSFMS 发表于 2013-2-6 11:08
投票支持仲华，人家资料好实在，呵呵，

这句听得我有点虚
合适就用吧
这个实验我以前做不少
有什么可能提出来大家讨论

仲华

QMSFMS 发表于 2013-2-6 11:08
投票支持仲华，人家资料好实在，呵呵，

这句听得我有点虚
合适就用吧
这个实验我以前做不少
有什么可能提出来大家讨论

dandelions

十分感谢版主的无私奉献