[征文]大肠菌群MPN法中接种量与培养基装量剖析(已转PDF)

caizhong07048

你是说单位吗？这个问题提的好
豪升的标准印刷表示方法是“mL”，ml是不规范的表示方法，但手写可以用ml表示，这里提出来给大家个提醒

caizhong07048

我再把它贴出来

大肠菌群MPN法中接种量与培养基装量剖析
现施行的GB/T 4789.3食品微生物检验大肠菌群计数中提供了三中检测方法，其中第二法和第三法检出限度为<10CFU/g（液体样品为<1CFU/mL），而很多食品的大肠菌群的限量标准为30MPN/100g以下，故其不适用。MPN法适用性广，与食品中大肠菌群限量要求方法一致，仍是最常用最有效的方法。但GB/T 4789.3中陈述的方法，术语简短，不能将整个过程的技术要点说明清楚，特别是在接种量与培养基装量方面，因此各人理解个不相同，做法也不尽相同。笔者通过自己的深入理解，对接种量与培养基装量方面进行剖析。
首先是接种量问题，GB/T 4789.3—2008 6.2中“每管稀释度接种3管LST，没个每管接种1mL（如超过1mL，则用双料LST）”。这里所说的接种量1mL并非1mL样品接种量（即MPN检索表中的1mL样品接种量），而是接种的稀释液的体积v=1mL（为了区分，本文中用v来表示），那么实际的接种量m（为了区分，本文中用m来表示）为：m=v×p (p为稀释液浓度)。那么括号中的接种量超过1mL就是要v >1mL，而MPN检索表中的实际接种量都为10-n 系列数，所以v也只可能是10 mL（100 mL在实际中不可能），也就是说接种体积v=1mL，用单料，v=10mL用双料。
列如： 25g样品+225mL缓冲液——1：10稀释液
1：10稀释液+9 mL缓冲液——1：100 mL缓冲液
若 1：10稀释液接种10 mL至双料LST，接种量为：10 mL×0.1g/mL=1g
1：10稀释液接种1 mL至单料LST，接种量为：1 mL×0.1g/mL=0.1g
1：100稀释液接种1 mL至单料LST，接种量为：1 mL×0.01g/mL=0.01g
培养基装量在GB/T 4789.3—2008没有作任何说明，所以各人的理解更是不一，可能有的人单双料都用10mL，有的人用9mL，有的更多或更少。那么到底培养基装量有没有什么规则，是不是怎样都行？其实不是，GB/T 5750.12—2006中总大肠菌群检测方法中2.1.5.1.1中使用的是单料双料都是10mL，这实际上是为了使得接种稀释液后所有的发酵管培养基浓度达到培养基本身的使用浓度。双料10mL，再接种10 mL稀释液后浓度降低一倍就还原了培养基本身的使用浓度，而单料它本身就是培养基的使用浓度，那么接种1mL稀释液后为了使培养基的浓度不至降低太多，就要让培养基装量尽可能的多，但是试管的装量也是有限度的，所以选择装量在10mL左右比较合适。
但笔者认为单料双料为10mL并不是最好的选择，最好的选择是用尽可能省的培养基，达到培养基的使用浓度。当双料装量为10mL时，再接入10mL样品稀释液，试管中就工有20mL液体，差不多占了试管一大半的高度，液面离试管口的距离近，这样试管在试管摇动和震动时很容易沾上试管口污染试管塞，容易早成污染，而且培养基消耗量多，遗弃时污染更大。那么我们可以用增加培养基的浓度方法来减少培养基的用量，如：10mL双料培养基接入10mL样品稀释液，可以使终浓度达到培养基使用浓度，那么3倍料的培养基只需5mL接入10mL样品稀释液即可达到相同浓度，这其中就减少了培养基的用量，当然这个浓度可以是2.5倍、2..6倍，根据自己的情况灵活使用。并且可以用一个公式算得。
设：培养基的使用浓度为a；v=10mL时培养基浓度为N×a，体积为V；
则 N×a×V= (V+10)×a
即 V=10/（N-1）
如 当N=2.5 V=6.7mL 也就是说接种体积v=10mL时，若采用2.5倍浓度培养基，只需要6.7 mL即可。
再如 当N=3 V=5mL 也就是说接种体积v=10mL时，若采用3倍浓度培养基，只需要5mL即可。
再来说下单料的装量，单料更简单了，就是也没必要一定要10mL，只需在培养基配置时少加入稀释液补充体积的水即可，假如你要配置10根管每管准备装培养基8 mL，那么在配培养基时称取80 mL所需要的培养基分量，加入水70 mL的水，分装时每管装7 mL，这样接种时再加入1 mL，就正好达到了培养基的使用浓度。
复发酵就更不用说，因为不存在培养基的稀释问题，可以随便加。
最后需要说明的是，培养基装量也不是越少越好，因为培养基的浓度过高在灭菌时可能回有影响，笔者采用2.5倍浓度培养基浓度，并通过与GB/T 5750.12—2006中总大肠菌群检测方法中2.1.5.1.1中使用的是单料双料都为10mL进行验证，试验结果没有偏差，证明做法可行。

[本帖最后由 caizhong07048 于 2009-12-14 10:11 编辑]

紫色冀

原帖由 caizhong07048于 2009-12-11 12:34 发表
你是说单位吗？这个问题提的好
豪升的标准印刷表示方法是“mL”，ml是不规范的表示方法，但手写可以用ml表示，这里提出来给大家个提醒

不是单位问题哦。1：100稀释液接种1 mL至单料LST，接种量为：1 mL×0.1g/mL=0.01g（红色注明的）

powerk0232

1：100稀释液接种1 mL至单料LST，接种量为：1 mL×0.1g/mL=0.01g

0.1g/mL 实际上时0.01mL,都1：100 了

zuomingfeng

楼主有创意，这个问题我从没有深究过，因为都有师傅带啊！！

caizhong07048

谢谢，写错了，没注意

贺俊烽

研究者精神可嘉！
但是改变一下试管不就可以了吗！双料的用大号试管，单料的用中号试管！不就可以了吗！
取稀释10倍的样品10毫升，其样品接种量为1g，菌种含量多故要较多的培养基！这只是个现象分析实验，后面还有分离鉴定实验!
大中号试管较容易分辨！

sihly

学习到新知识了，

gongzikun001

确实是的，国标欠改

释放空间71

好东西,好好学习一下了,谢谢楼主

zhangwenjie85

写的很好，实用又有创新，谢谢。

随意的风

呵呵！不断的学习才有进步