β-内酰胺酶的检测

dfbx

ZY-400β-内酰胺酶测量分析仪
北京东方博鑫科技发展有限公司
联系电话；13910232122
www.dfbx17.com
Email;dfbx108@sina.com

wawsw

我们现在正准备做，在筹备中，希望能多交流，借鉴经验

小朵儿

我们已经开始做了，貌似没那么难啊！

小朵儿

这个方法都做成试剂盒了，挺方便的，试剂、菌液都配好！不过试剂盒有点贵！

stanleyjie

请问那个试剂盒是在哪里买的？

chengyongyou

现在是胶体金试纸用的多还是微生物法产品用的多啊

saga0728

卫生部的方法可以做个参考，具体方法得自己摸索，主要是三个标样的浓度怎么确定。尤其是β-内酰胺酶
因为不同的生产商的β-内酰胺酶标准品它的酶活力单位是不一样的。

ziyi

β-内酰胺酶定量检测试剂使用说明书

β-内酰胺酶是指能催化水解β-内酰胺环酰胺键的灭活酶，分为青霉素酶、头孢菌素酶、金属酶和超广谱酶四种。其对青霉素的分解效率非常高，因此，添加在牛奶中确实可以完全水解青霉素， 使之不被检测出来。但是同样其风险也是存在的：1.β-内酰胺酶的安全性以及是否可以在食品中添加 尚未有定论；2.在分解β-内酰胺药物后，可能引进其他有害物质；第三，这种做法纵容了奶牛饲养过 程中抗生素的滥用。

【反应原理】
根据碘量法快速高效重复性好的特点，能快速测定β-内酰胺酶的残留量。
根据青霉素经β-内酰胺酶作用而产生的裂解酸与碘结合，可使蓝色的碘淀粉复合物褪色的原理： 青霉素+β-内酰胺酶 → 青霉素裂解酸 青霉素裂解酸 + 淀粉碘（蓝色）→ 褪色

【试剂盒组成】

试剂盒组份 数量 规格
试剂A（棕色瓶） 1 6ml
试剂B （本色瓶） 1 6ml
样品处理液 1 30ml
稀释液（本色瓶） 1 25ml
样品管（蓝色离心管） 24/48
48孔板/96孔板 1
说明书 1
样品处理管 24/48

【注意事项】
1. 本试剂盒仅供体外诊断用，不要将不同批号的试剂混合用，并请在有效期内使用。
2. 如试剂盒不能一次用完，请使用灭菌的移液头进行取样。
3. 本试剂盒适用于生乳中β-内酰胺酶检测，线性范围0～10U/ml，如有必要请用稀释液将样 品稀释后在进行试验。
4. 含大量脂质或变质的标本可能影响检测结果；如有需要可在实验前对样品进行离心（4000rpm，
10min）后取中间清液待测。


【试验方法】
1. 将试剂盒于室温回温30min 以上。 2. 取1000ul 待测样品加入样品管中 3. 将上述各管混匀后37℃孵育30min。
4. 取300ul 样品处理液加入样品处理管，再加入300 ul孵育后的样品溶液，充分混匀后以4000rpm
离心5min。
5. 取下清液200ul 加入96 孔板中，并加入50ul显色液（等体积混合的试剂A、试剂B）。
6. 578nm 下读取吸光度。
7. 根据下面公式计算β-内酰胺酶浓度

A空白，A标准每个批次将根据药典方法进行滴定后测定A空白和A标准，随试剂盒发出。

ziyi

?β内酰胺类胶体金检测卡的原理南京逸秀β-lactam快速检测试纸基于胶体金免疫层析技术。检测时，样品中的β-lactam在流动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体与固相载体膜上的β-lactam-BSA偶联物的结合，如果样品中的β-lactam含量大于灵敏度，检测线在规定时间内不显颜色，结果为阳性，反之，检测线显红色色带，结果为阴性。无论检测液中β-lactam浓度高低，C线均显红色色带。

? 使用范围
用于快速筛查奶中的β-lactam类。

? 灵敏度
药物名称 检出限
青霉素 青霉素G 4
氨苄西林 4
阿莫西林 4
苯唑西林 30
邻氯青霉素 30
双氯西林 30
萘夫西林 30
头孢 头孢乙腈 125
头孢氨苄 100
头孢洛宁 20
头孢唑啉 50
头孢哌酮 50
头孢喹肟 20
头孢噻呋 100
头孢匹林 60

? 交叉反应
用本品检测100ug/ml氯霉素类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、磺胺类等常用兽药，结果均呈阴性。

? 保存和稳定性
试纸卡于(2-8℃)阴凉干燥处保存，不可冷冻，避免阳光直晒，自生产日期起12个月内有效。

? 测试步骤
1. 将采集的牛奶样品编号，置于常温（20-30℃）室内，使用前需将本试纸条和待检奶样恢复至室温；
2. 从微孔条上取下所需数量的反应小杯，揭去杯面的密封塞，固定到恒温加热器上。
3. 取待测牛奶至吸管刻度线后全部滴入反应小杯中，然后用吸管对其进行反复吸放，直至小杯底部及四壁的红色物质全部溶解并混合均匀，孵育5min后，将试纸条没贴标签的一端充分浸入混合溶液中。
4. 5分钟判断结果，10分钟后的结果仅作参考。

? 结果判断
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。

? 注意事项
1．如果购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请在购买处进行更换；
2．所有试纸启封后1小时内使用；
3．本品为一次性产品，请勿重复使用；
4．样品需要放入冰箱冷藏，不宜室温保存；
5. 本试纸条的最佳孵育温度为40℃±3;不在此范围可能会对检测结果有影响；
6．请勿使用自来水、纯化水、冲调奶粉及蒸馏水作为阴性对照；最好使用明确阴性鲜牛乳做对照；
7．本品为筛选试剂，任何可疑及阳性结果请用其它方法作进一步确认。
【检测流程图】

【结果显示图】

草原寻影

chengyongyou 发表于 2013-7-18 09:36
现在是胶体金试纸用的多还是微生物法产品用的多啊

胶体金试纸好像用的不是太理想。

草原寻影

ziyi 发表于 2013-9-11 12:13
β-内酰胺酶定量检测试剂使用说明书

β-内酰胺酶是指能催化水解β-内酰胺环酰胺键的灭活酶，分为青霉素 ...

好用吗？好像假阳性挺多的。希望指点。

ziyi

当然好用了，现场操作，5分钟出结果，定性半定量的。产品雷竞技百科 百分百保证，如有任何雷竞技百科 问题，公司免费换货，有雷竞技百科 保证。不过产品自上市以来，还没出现过任何雷竞技百科 问题，这个您请放心！如果有需求和疑问，可电话咨询025-83231762或18994040563