8
、简述利用试剂盒法测定毒鼠强的原理并简述此方法检测固体样品的过程
?
●
试剂盒法检测原理:
毒鼠强可与二羟基萘二磺酸发生反应变为淡紫色,本方法检出限为
1ug
,最低检出浓度为
2ug/ml
,浓度高时可变为深红色。
●
检测固体样品过程:
取
2mL
或
2g
样品放入比色管中,加入
5mL
乙酸乙酯,充分振摇,静置,取上清液
2mL
于试管中或表面皿上,在
85
℃
左右水浴中加热
,
待乙酸乙酯剩余
1mL
以下时
,
提高水浴温度挥干余液,放至室温后,加入
1mL
的纯净水充分溶解残渣,加入
3
滴毒鼠强显色剂,轻轻摇匀,加入
5mL
毒鼠强试液,轻轻摇动后,将试管放入
90
℃
以上水浴中,加热
5min
后取出,观察颜色变化。溶液颜色变为淡紫红色为毒鼠强阳性反应,随着毒鼠强浓度增加,紫色加深。
9
、简述利用异羟肟酸铁快速检验氟乙酰胺的原理,简述此方法检测固体样品的过程
?
●
检测原理:
氟乙酰胺与羟胺在碱性条件下,生成异羟肟酸,与三价铁离子作用生成色异羟肟酸络合物。检出限
50μg/ml
。
●
方法:
取待检液
1ml
左右于试管中
(
同时取一份同等量的蒸馏水或纯净水于另一试管中做阴性对照实验
)
,各加盐酸羟胺溶液
5
滴,加氢氧化钠溶液
10
滴,置沸水中水浴
10
分钟以上,取出放冷后,加盐酸溶液调整溶液
pH
值到
3
~
4
之间,加三氯化铁溶液
3
~
4
滴,观察溶液颜色变化情况,阳性结果为粉红或紫红色。
●
固体过程:
取
2g
~
5g
捣碎后的样品,加
3
倍于样品重的纯净水,充分振摇,静置或过滤得到
1mL
左右的澄清液。测定:取待检液
1mL
左右于试管中,加氢氧化钠溶液
10
滴,加盐酸羟胺溶液
5
滴,置沸水中水浴
10min
,取出放冷,加盐酸溶液调
pH
值
3
~
5
后,加三氯化铁溶液
3
~
10
滴,阳性结果为粉红或紫红色,阴性结果为浅黄或黄色。
10
、叙述砷的快速检测原理方法以及过程
?
●
原理:
氯化金与砷相遇产生反应,可使氯化金硅胶柱变成紫红或灰紫色,在装有氯化金硅胶的柱中砷含量与变色的长度成正比,以此可达到半定量的目的。
●
方法过程:
取粉碎后的固体样品
1g
于反应瓶中,加入
20mL
蒸馏水或纯净水,固体样品需要振摇后浸泡
10min
,加入两平勺酒石酸,摇匀,加
10
滴消泡剂,摇匀。
取检砷管一支,将空端较长的一端头朝下,在台面上轻敲几下后,剪去两端封头,将空端较长的这头插入带孔的胶塞中。向反应瓶中加入一片产气片,
立即将带有检砷管的胶塞插入反应瓶口中,待产气停止,观察并测量检砷管中氯化金硅胶柱变成紫红或灰紫色的长度。
11
、亚硝酸盐的快速检测方法并简述基本原理和检测固体样品的过程
?
●
亚硝酸盐
(
速测管快速测定法
)
原理:
亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在偏酸性条件下发生重氮化形成重氮盐,重氮盐与盐酸萘乙二胺发生偶合反应而呈现酒红色。
●
检测固体样品过程:
取粉碎均匀的样品
1.0g
或
1.0ml
至
10ml
比色管中,加蒸馏水或去离子水
(
纯净水
)
至刻度,充分震摇后放置,取上清液
(
或过滤或离心得到的上清液
)1.0ml
加入到检测管中,盖上盖,将试剂摇溶,
10
分钟后与标准色板对比,该色板上的数值乘上
10
即为样品中亚硝酸盐的含量
mg/ kg
,
L(
以
NaNO2
计
)
。如果测试结果超出色板上的最高值,可定量稀释后测定,并在计算结果时乘上稀释倍数。
12
、液体样品甲醇的快速检测方法及基本原理
?
●
方法:
速测盒测定法。
(
用滴管取酒样
6
滴于离心管中,加入
5
滴
A
试剂氧化剂,放置
5min
,加入
4
滴
B
试剂还原剂,盖盖后上下振摇
20
次以上使溶液充分混匀,打开盖子,等溶液完全退色,加入
2
滴
C
试剂显色剂后,再加入
15
滴
D
试剂,观察管内颜色变化,
3min
后与对照图谱对比判断酒样中甲醇含量。
)
●
原理:
首先向样品中加入酸性高锰酸钾溶液,甲醇很容易氧化成甲醛,而其他醇类则不易氧化成相应之醛类。再与亚硫酸氢钠反应,将未反应的紫色高锰酸钾转变为无色,再加人
0.01 g
的变色酸二钠盐和
1mL
的浓硫酸,此指示剂只和甲醛起反应,变色酸二钠盐与甲醛反应的最终产物显紫色,与标准比色卡对照显示样品中甲醇含量。
13
、叙述胶体金免疫层析检验技术的基本原理并叙述结果判断方法以及举例说明在食品安全检测中的应用
?
●
基本原理:
样品加入样品吸收垫,样品中的液体首先溶解胶体金垫中含有的胶体金标记的鼠源性单克隆抗体。其次样品中待测抗原与胶体金颗粒标记的鼠源性单克隆抗体结合,形成抗原
-
抗体
-
胶体金复合物,并靠毛细作用向检测线移动。在硝酸纤维薄膜的检测线上固定有另一鼠源性单克隆二抗。
当样品层析至检测线时,可以进一步形成抗体
-
抗原
-
抗体
-
胶体金双抗体夹心复合物,并在检测线上聚积显现出一条可见的显色反应。无显色反应则表示样品中无抗原存在。而胶体金的量反应了待测抗原的量。
从加样垫中泳动过来的过量胶体金标记的单克隆抗体是鼠源性的,无论携带抗原与否,均可被固定于标准的羊抗鼠抗体所捕获,形成显色反应,这种显色反应,既代表了整个反应体系是正确的,同时
C
区的显色反应的深浅,与检测区中被测抗原的量呈对应关系。
●
结果判断:
将制备好的样品滴加到加样孔中,在指定时间内判定结果。如果检测线上出现红色条带,说明样品呈阳性,如果检测线上没出现红色条带,说明样品呈阴性。如果质控线无条带,说明试纸条无效。
●
应用:可用于快速检测乳品
—
饲料中三聚氰胺的快速检测
(
造假、非法添加物类
)
。
14
、酶联免疫检测法检测原理以及本方法的优点
?
●
原理:酶联免疫吸附试验法的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
在测定时,受检标本
(
测定其中的抗体或抗原
)
与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
●
优点:具有很高的特异性
;
另一方面由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性
;ELISA
法还具有简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点,且适用于大批量标本的检测。
15
、说明黄曲霉毒素试剂盒主要包括哪些组分并采用图示的方式说明双抗体夹心法测抗原的方法
?
●
组分:
已包被抗原或抗体的固相载体
(
免疫吸附剂
);
酶标记的抗原或抗体
(
结合物
);
酶的底物
;
阴性对照品和阳性对照品
(
定性测定中
)
,参考标准品和控制血清
(
定量测定中
);
结合物及标本的稀释液
;
洗涤液
;
酶反应终止液。
●
过程:
①
将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
②
加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
③
加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。
④
此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。
16
、目前针对苏丹红油溶性非食用色素现场快速检测方法原理及过程
?
●
检测原理:
层析法利用混合物中各组分物理化学性质的差异
(
如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等
)
,使各组分在两相
(
一相为固定的,称为固定相
;
另一相流过固定相,称为流动相
)
中的分布程度不同,从而使各组分以不同的速度移动而达到分离鉴定的目的。
●
过程:
①
样品处理:取约
1
克样品于容器中,加入
2
~
4 ml
乙酸乙酯,充分混匀,提取
1
分钟,静置
3
分钟以上。
②
样品点样:在层析纸端底向上约
1cm
处、平行相隔约
1cm
,分别用毛细管沾取样品点出
5
个直径在
0.5cm
左右的圆点,用毛细管分别沾取苏丹红
1
、
2
、
3
、
4
号对照液少许点在
1
、
2
、
3
、
4
号样品点上。
③
样品展开:
取一个
250ml
以上的烧杯,加入约
5ml
展开剂,将层析纸
(
样品端朝下
)
插入展开剂中靠在杯壁上,待展开剂延层析纸向上平行展开至层析纸顶端约
1
厘米处时取出层析纸,观察结果。
④
结果判断:
如果样品在展开轨迹中出现斑点,其斑点展开
(
向上跑
)
的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、颜色相同或颜色虽浅却相近时,即可判断样品中含有这一色素。
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