超高效液相色谱-串联质谱测定畜肉中14种β-受体激动剂

王中泰

超高效液相色谱-串联质谱测定畜肉中14种β-受体激动剂

前言

在动物饲养过程中使用β-受体激动剂类药物可以显著提高猪、牛、羊等动物的瘦肉率。但是残留β-受体激动剂的食物被消费者食用后会危害身体健康。

建立了超高效液相色谱-串联质谱快速检测畜肉中14种β-受体激动剂(克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯丙那林、特布他林、妥布特罗、溴布特罗、班布特罗、齐帕特罗、马布特罗、非诺特罗、福莫特罗、西马特罗、西布特罗)的方法,并对样品前处理和色谱条件进行了优化。

样品加入乙酸铵缓冲液(pH 5.2)和β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,在(36±2) ℃水浴中酶解16 h后,放置至室温。经0.5%甲酸乙腈提取,加入NaCl粉末使乙腈和水相分层,取5 mL上层乙腈,使用一步式净化固相萃取柱进行净化,50 ℃氮气吹干后用0.4 mL 0.2%甲酸水溶液复溶,过0.22 μm微孔滤膜后上机分析。以乙腈和0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱分析,经过Phenomenex Kinetex F5色谱柱分离后采用正离子扫描,多反应监测(MRM)模式进行检测,使用内标法和外标法定量。讨论了前处理过程中提取液的pH值、固相萃取柱种类、净化方式和复溶液的种类对提取效率的影响。采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱仪验证了一步式净化固相萃取柱的净化效果,证明了此类固相萃取柱能除去样品提取液中大部分的磷脂、鞘脂和甘油酯类物质。考察了仪器分析过程中色谱柱、流动相等影响因素。

采用质谱和废液切换模式,既保证了样品中的杂质能及时从色谱柱中流出,又避免过多的杂质进入质谱。结果表明,14种β-受体激动剂在1.0~50 μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,方法的检出限为0.1~0.2 μg/kg,定量限为0.3~0.6 μg/kg。在低、中、高3个加标水平下,14种β-受体激动剂的平均回收率为70.25%~117.48%,相对标准偏差为0.63%~14.29%。该方法稳定性好,准确度高,适用于畜肉中多种β-受体激动剂残留的检测。

样品前处理

称取2.0 g(精确至0.01 g)均质试样,置于50 mL塑料离心管中,加入0.2 mol/L乙酸铵溶液(pH 5.2)8.0 mL,再加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶50 μL和100 ng/mL的混合内标溶液40 μL,涡旋混匀后,于(36±2) ℃水浴16 h。

样品酶解后放置至室温,加入10 mL 0.5%甲酸乙腈,振荡提取10 min,加入3.0~3.5 g NaCl粉末,涡旋混匀,8000 r/min离心5 min,吸取5 mL上层清液过固相萃取柱,洗脱液在50 ℃条件下氮吹至近干,残留物用0.4 mL 0.2%甲酸水溶液复溶,超声10 min,涡旋混匀后过0.22 μm的微孔滤膜,供UHPLC-MS/MS分析。

分析条件

色谱条件 色谱柱henomenex Kinetex F5色谱柱(100 mm×2.1 mm, 2.6 μm);柱温40 ℃;流动相A: 0.1%甲酸水溶液,流动相B:乙腈;梯度洗脱程序:0~1.0 min, 5%B~10%B; 1.0~7.0 min, 10%B~70%B; 7.0~8.0 min, 70%B~100%B; 8.0~9.0 min, 100%B; 9.0~9.1 min, 100%B~5%B; 9.1~10.0 min, 5%B。流速:0.25 mL/min,进样量:2 μL。

质谱条件 电喷雾离子源正离子扫描方式(ESI+),MRM模式;高纯氮气,气帘气压力(CUR): 241.3 kPa(35 psi);喷雾气压力(GS1): 344.7 kPa(50 psi);辅助加热气压力(GS2): 344.7 kPa(50 psi);离子源温度:550 ℃;离子化电压:+5500 V。14种β-受体激动剂的保留时间、定量与定性离子对、去簇电压(DP)和碰撞能量(CE)见原文表1。

实际样品的测定

为了进一步验证方法的可行性和准确性,选取经国标方法测定含有克伦特罗的猪肉样品(3.6 μg/kg)、牛肉样品(5.7 μg/kg),以及含有沙丁胺醇的羊肉样品(2.8 μg/kg),用所建方法对这3份样品进行检测,定性结果与标准方法相同。定量结果显示,猪肉样品中克伦特罗的含量为3.9 μg/kg,牛肉样品中克伦特罗的含量为5.5 μg/kg,羊肉样品中沙丁胺醇的含量为3.0 μg/kg,结果均与国标方法接近,说明本方法准确可靠,可以用于畜肉中β-受体激动剂的定性和定量测定。

结论

本文建立了固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱同时测定畜肉中14种β-受体激动剂的方法。采用一步式净化固相萃取柱,既能有效去除样品中的干扰物质,又简化了固相萃取的操作,节省了实验时间。同时利用同位素内标法有效降低了实际样品的基质效应。此方法简单快捷,重复性好,准确度高,溶剂消耗量少,适合批量样品中β-受体激动剂残留的检测。

文章信息
色谱, 2023, 41(12): 1106-1114
DOI: 10.3724/SP.J.1123.2023.03008