TTC应该怎么用？

王中泰

TTC应该怎么用？

在公众号后台或者是微信好友群里，小伙伴经常问关于菌落总数检测计数问题，特别是遇到杂质和菌落不好区分，应该怎么办？小编今天与大家分享关于TTC添加的注意事项，把你搞定菌落和杂菌的区分问题。
TTC:俗称红四氮唑，学名2,3,5-三苯基氯化四氮唑，化学式如下：

从事微生物检测的朋友都知道，在菌落总数的检测时，经常添加这种物质，可以起到两方面的作用：
其一，可以使菌落显红色，便于区分菌落和杂质，更利于计数；
其二，可以有效的防止平板上的菌落蔓延情况。这两种作用的原理是不同的，TTC溶于水是无色的，而嗜中温性需氧菌在新陈代谢过程中产生的琥珀脱氢酶可以使无色的TTC被还原成红色的TPF，使菌落显色，这是显色的原理；

同时TTC还具有抑制某些革兰氏阳性菌生长的作用，因此会防止菌落蔓延。但既然会抑制细菌的生长，那会不会造成检测误差呢？其实只要合理使用，注意添加量，对检测结果的影响并不是很大，是可以忽略不计的。

有专家对此做过实验，实验结果表明培养基内TTC浓度在0.0003%-0.001%（w/v）的范围内对菌落生长抑制作用不显著，但浓度太低菌落的显色效果并不是很好，因此推荐大家按照TTC浓度为0.0005%的量来添加就不会对检测结果产生较大影响，还会使菌落显色方便计数。为了方便大家在检测过程中方便添加，小编特意做了一个表格，方便大家查询：

除了添加量之外，在使用我们还应该TTC过程中我们还应该注意些什么呢？
要点一：TTC的配制过程，一定要在无菌条件下进行。因为我们配制好的TTC溶液在检测时是直接加入到培养基中的，必须保证TTC溶液时无菌的，配制用水也必须是无菌水。

要点二：TTC具有比较强的光敏性，见光易分解，因此无论是TTC粉末还是配制好的TTC溶液都要注意避光冷藏保存，配制好的溶液一定要放在棕色的试剂瓶里。

要点三：TTC溶液要在检测过程中直接加入灭菌完的培养基中，即在倾倒平皿之前加入培养基然后摇匀使用。尽量不要将TTC溶液加入培养基后一起灭菌，这样操作会使培养基颜色加深，不利于显色和计数。

要点四：若显色效果不是很好，可以考虑提高一下TTC浓度，但不要超过0.001%的浓度，否则会使检测结果出现比较大的偏差。

要点五：加TTC溶液还可以有效的控制平板上的菌落蔓延情况，若是添加试剂的主要目的是为了控制菌落蔓延，建议增加培养基中TTC的浓度，浓度大约0.0008%时就会起到比较好的效果，并且不会影响结果。
任何方法都会是双刃剑，添加TTC显色当然也是如此，添加TTC最主要的问题就是它的抑菌作用，会造成检测结果偏低，因此很多人不愿使用。其实若是不存在杂质干扰或者一些特殊情况可以比较精确的计数，小编也建议大家不要一昧因为显色之后容易计数就进行添加，毕竟这只是在一些特殊情况下采用的非常规手段。

yujiansp

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王中泰

yujiansp 发表于 2024-1-27 21:35
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