反相固相萃取洗脱溶剂的选择

王中泰

反相固相萃取洗脱溶剂的选择

之前跟大家简单介绍过 固相萃取洗脱溶剂的选择 ，主要讲解了不同固相萃取柱对于洗脱溶剂的选择。今天详细给大家介绍下如何选择反相固相萃取柱对应的洗脱溶剂。

洗脱溶剂

固相萃取的洗脱溶剂最好与检测技术相匹配，可简化仪器进样前的样品处理。

■ 极性化合物：

通常采用 HPLC 作为检测手段，一般需要考虑是否可以用 HPLC 的流动相作为洗脱溶剂，如甲醇、乙腈等。

■ 非极性化合物：

通常采用 GC 或 GC/MS 作为检测手段，首选易挥发的非极性溶剂，如乙酸乙酯、氯仿、正己烷等。

目标化合物的溶解度是选择洗脱溶剂的重要指标之一。在反相固相萃取中，一般首选对目标化合物溶解度高的有机溶剂作为洗脱溶液。根据目标化合物的结构及官能团，依据相似相溶的原理，可选择极性相似的洗脱溶剂。

■ 非极性强的固相萃取柱选择非极性强的溶剂洗脱。

■ 非极性弱的固相萃取柱选择非极性弱的溶剂洗脱。

表 1 反相固相萃取中常用的洗脱溶剂

目标化合物	洗脱溶剂
非极性	1 ）正己烷 2 ）二氯甲烷
疏水（有一些极性特征）	1 ）丙酮 / 乙酸乙酯 3:1 2 ）四氢呋喃 3 ）甲醇、丙酮、乙腈
两性（中性 - 酸性）	1 ） 1% 乙酸 / 甲醇 2 ） 1% 乙酸 / 乙酸乙酯
两性（中性 - 碱性）	1 ）甲醇 /10% 氨水 2 ）甲醇 /2% 四乙胺

其中甲醇虽然属于强极性的溶剂，但大量实验数据证明甲醇足以破坏目标化合物与固相萃取填料的非极性官能团之间的非极性作用力，将目标化合物洗脱出来。

以上是我们常用到的洗脱溶剂，而从理论上来说对于洗脱溶剂的选择主要从溶剂的极性指数、溶剂的选择性、溶剂的洗脱强度三个方面来考虑，以达到好的分离效果。

王中泰

溶剂极性指数

我们把溶剂的极性指数（ P' ）按照一组溶剂对一组极性和非极性溶质的溶解能力的相对强弱而进行排列。溶剂的极性指数越大，对极性化合物的溶解能力越强。而溶剂的选择性是指溶剂选择性地溶解某一化合物的能力。

Snyder 将色谱常用的 71 种溶剂按质子给予、质子接受和色散作用力分为八类，以下为常用溶剂的极性指数和选择性分类。

表 2 常用溶剂的极性指数和选择性

溶剂	P?	选择性分类
正己烷	0	-
环己烷	0	-
四氯化碳	1	Ⅵ
二丁醚	1.7	Ⅰ
甲苯	2.3	Ⅵ
氯苯	2.7	Ⅶ
乙醚	2.9	Ⅰ
二氯甲烷	3.4	Ⅴ
醋酸乙酯	4.3	Ⅵ
异丙醇	4.3	Ⅱ
氯仿	4.4	Ⅷ
二氧己环	4.8	Ⅵ
吡啶	5.3	Ⅲ
丙酮	5.4	Ⅵ
乙酸	6.2	Ⅳ
乙腈	6.2	Ⅵ
甲醇	6.6	Ⅱ
水	10.2	Ⅷ

根椐实际需要可用各种不同的混合溶剂来达到实验所需的 P 值。混合溶剂 A 、 B 的 P' 值可根据公式计算：

P'= ФaPa +ФbPb

Фa 及 Фb 分别是：溶剂 A 与溶剂 B 在混合溶剂体系中所占比例。

Pa 及 Pb 分别是：溶剂 A 与溶剂 B 的极性指数。

当P'值确定后，可利用溶剂不同的选择性有选择地洗脱目标化合物。

洗脱强度

洗脱强度（ ε° ）就是溶剂从给定固定相洗脱目标物能力，它是单位面积洗脱溶剂的吸附能。

当某一混合洗脱溶剂对分析物洗脱力太强，但又同时把太多的杂质洗脱下来时，可选择与该洗脱溶剂洗脱强度相近的其他洗脱溶剂体系。同样可利用二元混合溶剂以达到不同的洗脱强度。

表 3 常见溶剂的洗脱强度

溶剂	洗脱强度
正己烷	0
戊烷	0
四氯化碳	0.14
甲苯	0.22
苯	0.27
无水乙醚	0.29
氯仿	0.31
二氯甲烷	0.32
四氢呋喃	0.35
丙酮	0.43
乙酸乙酯	0.45
乙腈	0.50
吡啶	0.55
异丙醇	0.63
甲醇	＞ 0.73
冰醋酸	＞ 0.73
水	＞ 0.73

反相固相萃取的洗脱过程只要掌握以上原理，就可以选择到合适的洗脱溶剂，对目标化合物进行更有效的洗脱。