聊聊菌种的那些事儿

王中泰

聊聊菌种的那些事儿

菌种

菌种是用于发酵过程作为活细胞催化剂的微生物，包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。来源于自然界大量的微生物，从中经分离并筛选出有用菌种，再加以改良，贮存待用于生产。

今天就带大家来了解一下菌种相关的小常识：

菌种代码的意义
国内常见微生物检验所用的菌种代号是：

CMCC （ F ）或 CMCC （ B ）

CMCC —— 中国医学菌种保藏中心

B —— 代表细菌， F ——代表真菌。

大肠杆菌 [CMCC (B) 44102] ；

乙型副伤寒沙门杆菌 [CMCC (B) 50094] ；

铜绿假单胞菌 [CMCC (B)10104] ；

金黄色葡萄球菌 [CMCC (B)26003] ；

生孢梭菌 [CMCC(B)64941] ；

白色念珠菌 [CMCC(F)98001] 。

菌种的复苏与保存

按照菌种的使用说明以及复苏液，在超净工作台或生物安全柜内进行复苏和保存。

常用菌种保藏方法

1. 琼脂斜面低温保存法

（ 1 ）方法：

将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把培养好的新鲜菌种用牛皮纸包好，为减缓培养基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏管的棉花塞换成橡胶塞。放在 4 ℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3 个月传代一次。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可保藏半年 ～ 一年。

（ 2 ）适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。

（ 3 ）特点：优点是——简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用；缺点是——保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。

（ 4 ）注意事项：

保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。

保藏时，破伤风杆菌可用庖肉培养基；生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。

每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。

保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于 2 % 为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。

铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，不宜用本法保存。

2 、液体石蜡保存法：

（ 1 ）方法：

将菌种接种于斜面或穿刺于 0.3~0.5 % 琼脂半固体高层培养基中，培养好备用。取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管 10~15ml ，加棉塞，瓶口包上纸， 121 ℃高压灭菌 30min ，取出置 37 ℃温箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器内除去液体石蜡中的水分。

将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基最上端 1 ㎝为宜，将试管直立，放入 4 ℃冰箱中保藏。

（ 2 ）适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保藏效果较差。

（ 3 ）特点：本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法主要使菌种与空气隔绝。

（ 4 ）注意事项：

保藏时，用新鲜培养物接种，应检查纯度和特征后，方可进行保藏。

使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一 边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培养，待长出新培养物后，再移种一次到新斜面上即可使用。

将沾有少量液体石蜡的接种针浸于 95% 酒精中片刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下烧灼时，液体石蜡四溅，引起污染。

液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制，如太多，会影响菌种交换气体，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，将缩短保藏期。一般以高出斜面 1 ㎝为宜。

制备无菌液体石蜡时，每管装量不能太多，否则分装到菌种培养基中易造成污染。

3 、磁珠保存法

将菌液浸入素烧磁珠 ( 或多孔玻璃珠 ) 后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入 1/2 管高的硅胶 ( 或无水 CaSO4) ，上铺玻璃棉，再放上 10~20 粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。

本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。

磁珠保存时间更长，使用方便，大大减轻操作人员的工作

。

菌种的传代与保存

方法一：斜面传代

冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约 30 分钟，待温度平衡后再移入超净工作台或生物安全柜。

点燃酒精灯（灭菌器），用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红 30 秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过 3 次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住试管塞，拨开试管塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。

堵上试管塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面 1 支，照上述操作打开试管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。

取出接种棒，在火焰旁将试管塞堵上，然后将接种棒在火焰上烧灼灭菌。

将已接种完的斜面置 35~37 ℃培养 22~24 小时，霉菌管一般置 20~25 ℃霉菌培养箱内培养 7 日。取出后放人冰箱保存，一般 3 个月转种一次。

方法 2 ：斜面 - 营养肉汤 - 分离平板 - 斜面

用接种环取上述斜面菌苔少许接种置营养肉汤中 (5ml/ 支 , 已灭菌 ) ，置 35~37 ℃培养 18~24 小时后，再用接种环取培养好的营养肉汤菌悬液，接种于分离平板，置 35~37 ℃培养 18~24 小时，用接种针选典型菌落划线于营养琼脂斜面，置 35~37 ℃培养 18~24 小时。一般同时接种几支管，其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中，其它用做工作菌种。

常用分离平板：

大肠埃希菌—— EMB 琼脂平板；

铜绿假单胞菌——溴化十六烷三甲铵琼脂培养基；

金黄色葡萄球菌——甘露醇氯化钠琼脂培养基。

菌种保管

菌种保管应有专人负责，双人双锁，确保菌种安全。

菌种领用、传代、保存都要有记录，包括名称、入库、领用、传代日期、鉴定者、主要鉴定性能、及灭活或 销毁情况。

沫小米12345

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