加标回收率和期间核查

王中泰

加标回收率和期间核查

回收率包括绝对回收率和相对回收率:
绝对回收率考察的是经过样品处理后能用于分析的药物的比例。
相对回收率严格来说有两种。一种是回收试验法，一种是加样回收试验法。前者是在空白基质中加入药品，标准曲线也是同此，这种测定用得较多，但有标准曲线重复测定的嫌疑。第二种是在已知浓度样品中加入药物，来和标准曲线比，标准曲线也是在基质中加药物。在测定样品的同时，于同一样品的子样中加入一定量的标准物质进行测定，将其测定结果扣除样品的测定值，以计算回收率。

加标回收率的测定可以反映测试结果的准确度。当按照平行加标进行回收率测定时，所得结果既可以反映测试结果的准确度，也可以判断其精密度。在实际测定过程中，有的将标准溶液加入到经过处理后的待测样品中，这不够合理，尤其是测定有机成分而试样须经预处理时，或者测定易挥发物等需要蒸馏预处理的成分时，不能反映预处理过程中的沾污或损失情况，虽然回收率较好，但不能完全说明数据准确。
一）加标回收的一般情况
空白加标回收：
在没有被测物质的空白样品基质中加入定量的标准物质，按样品的处理步骤分析，得到的结果与理论值的比值即为空白加标回收率。
样品加标回收：
相同的样品取两份，其中一份加入定量的待测成分标准物质；两份同时按相同的分析步骤分析，加标的一份所得的结果减去未加标一份所得的结果，其差值同加入标准物质的理论值之比即为样品加标回收率。

二）加标回收的计算：
加标回收率=(加标试样测定值－试样测定值)÷加标量×100%。
加标使用的前提条件：
一般对加标回收率的解释是：
“在测定样品的同时，于同一样品的子样中加入一定量的标准物质进行测定，将其测定结果扣除样品的测定值, 以计算回收率。”
因此使用理论公式时应当满足2个条件：
① 一样品的子样取样体积必须相等；
② 各类子样的测定过程必须按相同的操作步骤进行。

三）注意
进行加标回收率测定时，还应注意以下几点：
（1）、加标物的形态应该和待测物的形态相同。
（2）、加标量和加标回收率测量的精密度应予以控制，一般情况下有如下规定：
① 加标量应尽量与样品中待测物含量相等或相近，应注意对样品容积的影响。
② 当样品中待测物含量接近方法检出限时，加标量应控制在校准曲线的低浓度范围。
③ 在任何情况下加标量均不的大于待测物含量的3倍。
④ 加标后的测定值不应超出方法的测量上限的90%。
⑤ 当样品中待测物浓度高于校准曲线的中间浓度时，加标量应控制在待测物浓度的半量。
（3）、由于加标样和样品的分析条件完全相同，其中干扰物质和不正确操作等因素所导致的效果相等。当以其测定结果的差值计算回收率时，常不能确切反映样品测定结果的实际差错。
国家标准 GB/T 27404-2008 《实验室雷竞技百科 控制规范 食品理化检测》中对回收率试验做了如下规定：
对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行三水平试验；对于已制定最高残留限量（MRL）的，回收率应在方法测定低限、MRL、选一合适点进行三水平试验；对于未制定MRL的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标、选一合适点进行三水平试验。回收率的参考范围见表。

如何进行标准物质期间核查？
实验室资质认可提出要求做标准物质期间核查，实验室应定期对标准物质进行核查，以便采取适当的方法或措施，尽可能减少和降低由于标准参考物质校准状态失效产生的成本和风险。
首先
什么是标准物质期间核查？
答：
标准物质期间核查是指标准物质在有效期内，按照标准物质证书上所规定环境条件、储存方法、检测分析方法，进行使用期中间稳定性的检查，以确保标准物雷竞技百科 值的准确性。在ISO/IEC17025中对标准物质提出，期间核查应根据规定的程序和日程对参考标准、基准、传递或工作以及标准物质（参考物质）进行核查，以保持其校准状态的置信度。
核查对象
核查对象为实验室有证标准物质、标准样品或质控样，以及已开封正在使用的标准物质储备液、标准气体、固体标准物质等的核查，规范标准物质及由标准物质配制而成的标准储备液的期间核查。
核查频度
应具体分析实验室内每一种标准物质的每一个参数，根据其对检测结果影响的程度确定核查的频度。
1.经常使用的
有效期较短的（如6个月）、对检测结果影响较大的一些标准物质应缩短核查间隔，严格核查标准，一旦出现分析结果可疑的情况，只需追溯至上次核查后的数据，以降低实验室的风险。
2.不常使用的
标准物质可以在每次使用前进行核查。
3.已有证标准物质
稳定性较好的，如未开封的有证标准物质，原则上只执行未开封标准物质的核查方法。只要技术和经济条件允许，也可用有效的标准溶液与该标准溶液作比较，看两种溶液有无显著性差异。
4.只用于加标的回收试验的标准物质，核查其不确定度可能比其溯源性更有意义。
核查参数
核查参数包括种类、级别、介质、浓度（含量）、有效期、批号、账物相符、环境条件、储存方法、检测分析方法等。根据核查种类、核查方法的不同而有选择的进行核查。
1.种类
实验室各检测项目所对应的标准物质。对新增检测项目所对应的标准物质或标准样品应及时纳入核查管理范围。

2.级别
化学分析实验室常用的标准物质一般有国家一级标准物质、国家二级标准物质、工作标准物质、色谱纯、优级纯、分析纯等 ，根据测定方法或有关规定对标准参考物质准确度的要求，核查实验室是否选用了合适的标准物质级别。

3.介质
核查所用标准物质的介质是否满足监测方法对标准物质介质的要求。

4.浓度（含量）
根据监测方法要求，核查是否购买或使用了合适的储备液浓度（含量）及工作用标准溶液，它的选择将直接影响标准物质有效性的判定和核查频度的选定。

5.有效期、存放条件
依据检测方法或标准物质证书检查标准物质是否过期、存放条件是否满足要求。

6.检测分析方法
当有证标准参考物质证书上有检测分析方法要求时，要对照其证书核查实际使用的监测方法是否与证书提供的相一致。

7.有效性
排除了标准物质证书上所规定环境条件、储存方法、检测分析方法等影响因素后，再进行有效性核查。

核查方法
标准物质的核查除了外观，存储条件等项目外，量值的重新验证是一项较为困难的工作。实验室应如何选择行之有效的检测标准来对标物实施核查呢？有以下几种方法：
1.基准方法
在化学测量领域，基准方法是一种具有最高计量特征的方法，基准直接法测量未知样的值不需要用同量的标准作参照，以下是几种确定了的潜在的基准测量方法：
（1）同位素稀释质谱法；
（2）库仑法；
（3）称量法；
（4）滴定法；
（5）凝固点降低法。
称量法广泛用于溶液及混合气体的制备，凝固点降低法用作直接法测定材料的纯度（物质的量的分数），同位素稀释质谱法广泛用于材料定值及其它高雷竞技百科 的测定。
2.根据有证标准物质的说明书来对其核查
某些标物说明书中已提供了其定值方法，比如煤炭的热值、灰分，铁矿石里的全铁含量。由于煤的热值的定值方法为唯一的燃烧测量法，煤灰分的经典的重量法，铁矿石的全铁含量为重铬酸钾滴定法，铜矿石的铜项目可用称量法或AAS等。所以，实验室可以参考此类方法对标准物质进行核查。在资源允许的情况下，进行高等级的验证。
结果评定
如何根据实验的结果来评价标准物质测量值，是否处在置信区间，我们必须依据数理统计理论来对其测试结果作出合理的评定。
1.用t检验法对量值进行期间核查
t检验法适用于样本容量较小、样本方差没有显著性差异的两组数据的比较检验。
2.En数法
En数法判定准则如下：
若En≤1则判定结果为满意（表明标准物质校准状态的置信度得到保持），否则判定为不满意。
3.按临界值（CD值）判定
如果用于该检测的标准方法可以提供可靠的重复性标准偏差Sr和再现性标准偏差SR，则可用临界值（CD值）对标准物质核查结果进行判定。
该方法的判定准则如下：
若标准物质在重复条件下n次测定的平均值x与保证值μ0之差的绝对值小于临界值CD值，则该测定结果为满意（表明标准物质校准状态的置信度得到保持），否则判定为不满意。
4.按专业标准方法规定评定
在En值及CD值均不可获得时，如相应专业标准规定了测试结果的允许差，可按标准规定判定。
该方法的判定准则如下：
若，Z≤1则判定核查结果为满意（表明标准物质校准状态的置信度得到保持），否则判定为不满意。
示例：
用有证标准物质稀释并配制一条工作曲线，对一已知浓度的有证标准样品进行测试，记录结果C1并与该标准样品的证书定值C进行比较。同时用需进行核查的标准储备液稀释并配制一条工作曲线，对该已知浓度的有证标准样品进行测试，记录结果C2并与该标准样品的证书定值C进行比较。
结果判定：
C1与C相比较，若C1在C的不确定度范围内，则表示该测试操作过程正确无误，没有带来样品的损失或者污染；若C1不在C的不确定度范围内，则表示该测试操作过程中有样品损失或者带入了新的污染，应认真分析并查找原因，重新进行核查。只有在测试操作过程正确无误的情况下，比较C2 与C的值才有意义。
C2与C相比较，若C2在C的不确定度范围内，则表示该储备液的示值与实值在允许的不确定度范围内，判定该储备液合格，可以继续使用；若C2不在C的不确定度范围内，则表示该储备液在配制、使用、储存过程中有损失或者带入了新的污染，应立即停止使用，并认真分析、查找原因，重新配制新的储备液。

注意：
标准物质的期间核查易被忽略，但它又是认证不可忽略的一环，千万要引起我们的重。
实验室资质认可提出要求做标准物质期间核查，实验室应定期对标准物质进行核查，以便采取适当的方法或措施，尽可能减少和降低由于标准参考物质校准状态失效产生的成本和风险。