根据样品特性选择检测器和分离模式

王中泰

根据样品特性选择检测器和分离模式

液相色谱检测方法的建立需要针对不同的样品和分析目的，选用不同的分离模式和检测器，充分发挥仪器性能，高效地达到分析目标。通常使用单一检测器直接检测可达到目标，必要时可衍生化后再检测，或用多检测器组合检测。分离模式选择与检测器选择的原则基本统一，即根据分析物结构性质初步判断分离模式及流动相的选择：根据分析物结构性质、分离模式、样品处理方式、流动相的选择等进行检测器的配套选择。分离模式和检测器的选择是色谱方法开发中不可分割的相互统一的重要环节。

关于分离模式和检测器的选择，以下案例或可说明一二

一、脂肪族生物胺检测分析

脂肪族生物胺样品特性：此类物质紫外可见光区吸收极弱，衍生化程序繁琐效率低且易误差损失，是水溶性的极性物质。

方法开发思路：根据这些基本条件，我们判断可以选择 HILIC 模式， ELSD 检测器直接检测。

检测效果见下图：

月旭 Ultimate? HILIC Amphion II

对四种脂肪族生物胺的分离

保留 时间 min	峰宽 min	峰面积	高度	峰面积 %	分离度 USP	拖尾 因子	理论 塔板数 USP
4.53	0.07	24.73	5.56	36.97	-	1.09	21201.54
4.86	0.08	26.70	5.57	39.91	2.69	1.14	24255.04
7.15	0.08	7.14	1.05	10.67	13.66	1.15	18615.74
11.39	0.14	8.33	0.99	12.45	13.18	1.38	85762.45

二、甘油酯检测分析

甘油酯样品特性：此类物质为脂溶性大，不溶于水或难溶于甲醇的非极性物质。

方法开发思路：这样的物质适用非水反相色谱法，案例见 <非水反相色谱法应用案例及注意事项> 。

三、氨基酸检测

氨基酸样品特性：部分紫外吸收弱，大极性和水溶性。

方法开发思路：可选择衍生化法和非衍生化法。

两种方法的分离效果见下图：

月旭 Ultimate? Amino Acid Plus

对 23 种氨基酸的非衍生法分离

月旭 Ultimate? Amino Acid

对 19 种氨基酸的衍生化法分离

四、单糖寡糖类分析

单糖寡糖类样品特性：水溶性的极性样品，弱紫外可见吸收。

方法开发思路：这类物质常选择示差检测器。

月旭 Ultimate? XB-NH2 分析乳果糖 五、蛋白、 RNA ，病毒等样品分析 蛋白、 RNA ，病毒等样品特性：大分子。 方法开发思路：选择体积排阻色谱法。

月旭 Xtimate? SEC-120 分析 RNA

月旭 Xtimate? SEC-2000 分析去致病基因的痘病毒

月旭 Xtimate? SEC-300 分析 IgG 蛋白