食品中蔗糖的检测

zhanghu1111

各位大神，我们对不添加蔗糖类饼干进行蔗糖含量的检测，采用了GB5009.8第二法，但检测结果对委托第三方实验室检测的偏高（第三方实验室采用的是GB5009.8第二法），偏差近1倍，请问各位大神，是不是我们哪个步骤错了？

GB5009.8 第二法酸水解- 莱因- 埃农氏法

样品：无糖类饼干

试剂配制

A. 乙酸锌溶液:称取乙酸锌21.9g,加冰乙酸3mL,加水溶解并定容于100mL。

B. 亚铁氰化钾溶液:称取亚铁氰化钾10.6g,加水溶解并定容至100mL。

C. 盐酸溶液(1+1):量取盐酸50mL,缓慢加入50mL水中,冷却后混匀。

D. 甲基红指示液(1g/L):称取甲基红盐酸盐0.1g,用95%乙醇溶解并定容至100mL。

E. 氢氧化钠溶液(200g/L):称取氢氧化钠20g,加水溶解后,放冷,加水并定容至100mL。

F. 碱性酒石酸铜甲液:称取硫酸铜15g和亚甲蓝0.05g,溶于水中,加水定容至1000mL。

G. 碱性酒石酸铜乙液:称取酒石酸钾钠50g和氢氧化钠75g,溶解于水中,再加入亚铁氰化钾4g,完全溶解后,用水定容至1000mL,贮存于橡胶塞玻璃瓶中。

H. 标准溶液配制葡萄糖标准溶液(1.0mg/mL):称取经过98°C~100°C烘箱中干燥2h后的葡萄糖1g(精确到0.001g),加水溶解后加入盐酸5mL,并用水定容至1000mL。此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖

1 、试样的制备

固体样品取有代表性样品至少200g, 用粉碎机粉碎, 混匀, 装入洁净容器, 密封, 标明标记。

2 、试样处理

含大量淀粉的食品：称取粉碎或混匀后的试样10g~20g( 精确到0.001g), 置250mL 容量瓶中, 加水200mL, 在45 °C 水浴中加热1h, 并时时振摇, 冷却后加水至刻度, 混匀, 静置, 沉淀。吸取200mL 上清液于另一250mL 容量瓶中, 缓慢加入乙酸锌溶液5mL 和亚铁氰化钾溶液5mL, 加水至刻度, 混匀, 静置30min, 用干燥滤纸过滤, 弃去初滤液, 取后续滤液备用。

3 、酸水解

吸取2 份试样各50.0mL, 分别置于100mL 容量瓶中。

A. 转化前:一份用水稀释至100mL。

B. 转化后:另一份加(1+1)盐酸5mL,在68°C~70°C水浴中加热15min,冷却后加甲基红指示液2滴,用200g/L氢氧化钠溶液中和至中性,加水至刻度

4 、标定碱性酒石酸铜溶液

吸取碱性酒石酸铜甲液5.0mL 和碱性酒石酸铜乙液5.0mL 于150mL 锥形瓶中, 加水10mL, 加入2 粒~4 粒玻璃珠, 从滴定管中加葡萄糖标准溶液约9mL, 控制在2min 中内加热至沸, 趁热以每两秒一滴的速度滴加葡萄糖, 直至溶液颜色刚好褪去, 记录消耗葡萄糖总体积, 同时平行操作三份, 取其平均值, 计算每10mL( 碱性酒石酸甲、乙液各5mL) 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的雷竞技百科(mg)

5 、试样溶液的测定（因预测蔗糖含量低采用反滴定）

精确滴定: 吸取碱性酒石酸铜甲液5.0mL 和碱性酒石酸铜乙液5.0mL 于同一150mL 锥形瓶中, 加入试样溶液10mL, 放入几粒玻璃珠, 置于电炉上, 使其在2min 内沸腾, 维持沸腾状态2min, 以每两秒一滴的速度徐徐滴入葡萄糖标准溶液, 溶液蓝色完全褪尽即为终点, 分别记录转化前葡萄糖标准溶液和转化后葡萄糖标准溶液消耗的体积(V) 。

6 、转化糖的含量

试样中转化糖的含量( 以葡萄糖计)

按式(2) 进行计算:

R=m2/(m ×50/250 ×10/100 ×1000) ×100..............................(2)

式中:

R ———试样中转化糖的雷竞技百科 分数, 单位为克每百克(g/100g);

m2 ———滴定时消耗的葡萄糖标准溶液体积与标定时消耗的葡萄糖标准溶液的体积之差相当于10ml 样液中所含的葡萄糖的雷竞技百科, 单位为毫克(mg);

m ———样品的雷竞技百科, 单位为克(g);

50 ———酸水解(14.2) 中吸取样液体积, 单位为毫升(mL);

250 ———试样处理(14.1) 中样品定容体积, 单位为毫升(mL);

10 ———滴定时消耗试样溶液体积, 单位为毫升(mL);

100 ———酸水解(14.2) 中定容体积, 单位为毫升(mL);

1000 ———换算系数;

100 ———换算系数。

7 、蔗糖的含量

试样中蔗糖的含量X 按式(3) 计算:

X=(R2-R1) ×0.95..............................(3)

式中:

X ———试样中蔗糖的雷竞技百科 分数, 单位为克每百克(g/100g);

R2 ———转化后转化糖的雷竞技百科 分数, 单位为克每百克(g/100g);

R1 ———转化前转化糖的雷竞技百科 分数, 单位为克每百克(g/100g);

0.95 ———转化糖( 以葡萄糖计) 换算为蔗糖的系数。

yazhouhou

要么，换用第一法，比对一下结果。
要么，用第二法，测定含蔗糖质控样品、进行样品的蔗糖加标回收、或者直接测定蔗糖，验证结果有效可靠。

楼主看看，葡萄糖标准品、葡萄糖标准溶液是否变质失效。
楼主可以拿出，自家测定过程中的各步数据，看看结果是否计算错误，以与各方详细讨论比较。

zhanghu1111

yazhouhou 发表于 2023-5-2 09:38
要么，换用第一法，比对一下结果。
要么，用第二法，测定含蔗糖质控样品、进行样品的蔗糖加标回收、或者直 ...

我们采用的是：委托第三方实验室采用第一法测定蔗糖，我们实验室用第二法测定蔗糖，做个对比，但是结果差异较大，接近1倍，是不是我们操作步骤有问题？

yazhouhou

楼主说的“偏高”，是高多少？
如果，本来都是非常低的结果数值，在各自绝对量很低的情况下，两家实验室之间、方法之间的相对差异显得大些，也是可以理解的。具体的允许差，需要开展统计工作才能确定。

现在，楼主先把，自家的测定过程各步数据、计算过程，列出来，看看是否正确。

zhanghu1111

yazhouhou 发表于 2023-5-2 10:18
楼主说的“偏高”，是高多少？
如果，本来都是非常低的结果数值，在各自绝对量很低的情况下，两家实验室之 ...

谢谢您的回复，我们和第三方实验室检测的结果差异大约在0.6%左右，例如第三方实验室检测结果是0.6%，我们的结果是1.2%，我们考虑是不是我们的操作步骤和计算方法出现了问题，所以把我们的操作步骤和计算公式贴出来，还请您给予指正。

yazhouhou

zhanghu1111 发表于 2023-5-2 09:58
我们采用的是：委托第三方实验室采用第一法测定蔗糖，我们实验室用第二法测定蔗糖，做个对比，但是结果差 ...

第一法与第二法的测定原理不同。
第二法，基于滴定还原性的糖，利用蔗糖酸水解转化前后的还原糖含量的差值，来计算蔗糖含量。

本来，滴定测定还原性糖，就受到操作条件手法经验等等影响，可能具有较大误差。
再如果，样液中引入了，不是蔗糖也不能在转化前被滴定、却在水解转化蔗糖步骤里被一并水解为可被滴定的总转化还原糖的，干扰物质，就会使得计算出的蔗糖含量偏高。
这些与样品本身、测定处理操作、酸水解的浓度温度时间……等等因素有关，可以采用比如前边回复提到的方法进行雷竞技百科 控制，确定结果的有效性。

在没有具体过程数据的情况下，仅仅看楼主写的测定过程，发现，公式(2)与实际操作不符合。
公式(2)里，漏掉了“2、试样处理”里边的“……吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中……”步骤。

公式应该是：
R=m2×100/(m×10/100×50/250×200/250×1000)...................(2)

式中:
R———试样中转化糖的雷竞技百科 分数,单位为克每百克(g/100g);
m2———滴定时消耗的葡萄糖标准溶液体积与标定时消耗的葡萄糖标准溶液的体积之差相当于10ml样液中所含的葡萄糖的雷竞技百科 ,单位为毫克(mg);
100———换算系数；
m———样品的雷竞技百科 ,单位为克(g);
10———滴定时消耗试样溶液体积,单位为毫升(mL);
100———酸水解(14.2)中定容体积,单位为毫升(mL);
50———酸水解(14.2)中吸取样液体积,单位为毫升(mL);

250———试样处理(14.1.2)中处理上清液后定容体积,单位为毫升(mL);
200———试样处理(14.1.2)中吸取上清液体积,单位为毫升(mL);

250———试样处理(14.1.2)中样品定容体积,单位为毫升(mL);
1000———换算系数。

zhanghu1111

yazhouhou 发表于 2023-5-4 09:19
第一法与第二法的测定原理不同。
第二法，基于滴定还原性的糖，利用蔗糖酸水解转化前后的还原糖含量的差 ...

非常感谢您的回复，对于操作中可能引起误差的因素，我们非常赞同。但公式的调整，按照您的建议，结果会更高了，我们的公式是参照GB5009.8调整的，原GB5009.8也没有200/250。

yazhouhou

zhanghu1111 发表于 2023-5-4 17:06
非常感谢您的回复，对于操作中可能引起误差的因素，我们非常赞同。但公式的调整，按照您的建议，结果会更 ...

注意，公式(2)，是5009.8的缺陷之处。
仔细看标准，14.1.2 条 含大量淀粉样品的处理操作，与其他食品的操作不同。所以，计算式也应该不同。而标准的计算式，忘记了这一点，是个缺陷。

14.1.2条，希望只对溶解的糖作后续步骤、避免把淀粉带到后边的试液里，所以，增加了一步取上清液再定容的操作。计算时，理应把这层关系放到式子里。