猪肉中氯霉素的测定

王中泰

猪肉中氯霉素的测定

氯霉素（ chloramphenicol ， CAP ）是一种广谱性抗生素，是某些微生物，如（ Streptomyces venezuelae ）的次生代谢产物，能有效地抗革兰氏阳性、革兰氏阴性、里克次氏体、支原体、衣原体等微生物。自 1950 年以来，氯霉素因方便适用，价格便宜，而作为兽药被广泛的使用。氯霉素因被发现对人体骨髓造血机能有抑制作用，可引起人的粒细胞缺乏病，再生障碍性贫血和溶血性贫血，甚至可导致食用者死亡。

目前，检测氯霉素的方法大致可分为筛选方法和确证方法。

常用的筛选方法有微生物学方法、放射免疫法和酶联免疫法。微生物法灵敏度低、反应选择性差；放射免疫法存在同位素半衰期短、放射性污染等不足；酶联免疫法作为目前检测氯霉素的主要方法，又有假阳性高、不能确证的缺点。

确证方法中气质联用法需要对氯霉素分子中的两个羟基进行衍生化以提高其挥发性，实验周期长，步骤繁琐。 LC-MS 法具有定性、定量准确，检测限低，无需衍生化等优点。

一、参考标准

GB31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法

二、提取步骤

称取样品 5.00g 于 50mL 离心管中，加入 4% 氯化钠溶液 5mL ，乙腈 5mL ，涡旋 2min ， 8000 r/min ，离心 5min ，取上清液，残渣重复提取 1 次，合并上清液。加入正己烷 5mL ，涡旋振荡 1min ， 4000r/min ，离心 5min ，弃去上层液，正己烷重复处理 1 次。加水饱和的乙酸乙酯溶液 5mL ，涡旋 60s ， 4000r/min ，离心 5min ，上层液转移到 15mL 离心管中，重复提取 1 次，合并提取液， 45 ℃ 氮气吹干，加水 - 乙腈（ 95:5 ） 3mL ，溶解，备用。

取固相萃取柱 Welchrom? C18E 500mg 3mL ，依次用甲醇、水各 10mL 预洗；

取备用液过柱；

加水洗柱 2 次，每次 3mL ；

加入 4mL 甲醇水（ 50:50 ）洗脱，过柱流速为 1 滴 /s ；

加水饱和乙酸乙酯溶液 4mL ，涡旋 1min ， 4000r/min ，离心 5min ，取上层液，重复处理 1 次，合并上层液，氮气吹干。流动相 1mL 溶解，混匀，过 0.22μm 滤膜，上机。

注：由于填料较厚，导致无法自然滴落，需要使用真空泵，保持 1 滴 /s 流速。

三、色谱条件

色谱柱：月旭 Boltimate? LP-C18 Core Shell(2.1×150mm ， 2.7μm) 。

流动相：甲醇：水 =50 ： 50 ；

柱温： 30 ℃ ；

流速： 0.3 mL/min ；

进样量： 5μL 。

四、质谱条件

离子源： ESI ；

检测方式： MRM ；

干燥气：氮气， 350 ℃ ，流速： 1000L/Hr ；

碰撞气：氩气；

离子喷雾电压： 1.5kV 。

名称	母离子 （ m/z ）	子离子 （ m/z ）	Cone (V)	Collision (V)	Polarity
氯霉素	321.2	152.1*	30	18	Negative
		194.2		10
		257.2		10

五、谱图数据

猪肉本底

氯霉素标准溶液浓度 1ng/mL

1ng/mL 样品加标回收，回收率 101% 。

结论

使用 Welchrom? C18E 500mg 3mL SPE 净化后，回收率满足要求。