血清学反应

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　血清学反应是指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。

　　血清学反应的一般特点：

　　1)抗原抗体的结合具有特异性，当有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。

　　2)抗原抗体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。

　　3)抗原抗体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。　　4)血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原抗体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在第二阶段反应中，电解质、PH、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。习惯上将经典的血清学反应分三种类别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。

　　一：凝集反应

　　颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutination reaction）。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。　　１）直接凝集反应

　　颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。

　　a.玻片凝集法。是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即为阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定。

　　b.试管凝集法。是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。如肥达氏反应就是诊断伤寒、副伤寒的试管凝集试验。因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2—4小时观察，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。

　　２）间接凝集反应

　　将可溶性抗原（抗体）先吸附在一种与免疫无关的，颗粒状微球表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在有电解质存在的条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应(Indirect agglutination)。由于载体增大了可溶性抗原的反应面积。当载体上有少量抗原与抗体结合。就出现肉眼可见的反应，敏感性很高。

　　２、沉淀反应

　　可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。

　　１）环状沉淀反应：是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色的沉淀圆环。

　　２）絮状沉淀反应：将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者比例适当时，会出现肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。

　　３）琼脂扩散试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者比例合适，在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型。单向扩散是一种定量试验。可用于免疫蛋白含量的测定。而双向扩散多用于定性试验。由于方法简便易行，常用于测定分析和鉴定复杂的抗原成分。　　３、补体结合反应

补体结合反应(Complement fixation reaction)是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。如果补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会出现溶血现象，如果与细菌及相应抗体复合物结合，就会出现溶菌现象。因此，整个试验需要有补体、待检系统（已知抗体或抗原、未知抗原或抗体）及指示系统（绵羊细胞和溶血素）五种成份参加。其试验原理是补体不单独和抗原或抗体结合。如果出现溶菌，是补体与待检系统结合的结果，说明抗原抗体是相对应的，如果出现溶血，说明抗原抗体不相对应。此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少量抗原和抗体，所以应用范围较广。

红细胞溶解

红细胞破裂,血红蛋白逸出称红细胞溶解,简称溶血.可由多种理化因素和毒素引起.在体外,如低渗溶液,机械性强力振荡,突然低温冷冻（-20℃～—25℃）或突然化冻,过酸或过碱,以及酒精,乙醚,皂碱,胆碱盐等均可引起溶血.人血浆的等渗溶液为0.9％NaCl溶液,红细胞在低于0.45％NaCl溶液中,因水渗入,红细胞膨胀而破裂,血红蛋白逸出.在体内,溶血可为溶血性细菌或某些蛇毒侵入,抗原-抗体反应（如输入配血不合的血液）,各种机械性损伤,红细胞内在（膜,酶）缺陷,某些药物等引起.溶血性细菌,如某些溶血性链球菌和产气荚膜杆菌可导致败血症.疟原虫破坏红细胞和某些溶血性蛇毒含卵磷脂酶,使血浆或红细胞的卵磷脂转变为溶血卵磷脂,使红细胞膜分解.

制剂安全试验项目

溶血是指红细胞破裂溶解现象。很多理化因素都可以引起溶血。该试验主用于检查注射剂中化学物质如胆酸盐、皂式等对红细胞壁的破坏溶解程度，以便在制备时对其含量加以限制，确保安全。目前对中药注射剂可用如下方法：取试管3支，各加新鲜配制的2％兔血生理盐水混悬液2.0ml，第一管加生理盐水2.0ml作为对照管，第二管加供试品稀释液（甲液）2.0ml，第三管加供试品稀释液（乙液）2.0ml，摇匀，置37℃静置，观察1小时。若第二管整个血样因药液引起红细胞全部破裂，呈现红色澄清液时为溶血试验阳性，不宜供注射用。第三管为检查有无粘集反应，亦应阴性，否则不直供静脉注射用。对照管应无溶血和粘集现象。甲液为供试品溶液0.5ml，加生理盐水稀释至100ml摇匀，即得。乙液为洪静脉注射的供试品溶液1.0ml，加生理盐水稀释至10ml，摇匀，即得。2％兔血生理盐水混悬液配制时取2ml无凝血和溶血现象的家兔全血，加生理盐水稀释至100ml摇匀，即得。

yujiansp

学习学习。谢谢。

xaygsw

yujiansp 发表于 2022-2-7 12:34
学习学习。谢谢。

好的，不客气！