动物性食品中氨丙啉残留量测定的前处理方法

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氨丙啉的危害及检测目的

氨丙啉是一种抗球虫药，主要以盐酸盐形式存在，在世界范围内被广泛应用于防治球虫病。由于该药高效、安全，不易引起球虫耐药性，在鸡、兔、犊牛、羔羊中均有应用。盐酸氨丙啉虽然毒性较低，但是由于不规范使用，抗球虫药长期、持续添加在饲料中，极容易造成药物在肉及蛋品中的残留现象，危害人体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中明确规定了氨丙啉在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氨丙啉从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据行标SN/T 4583-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氨丙啉

应用范围： 鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法方法原理：试样中的氯丙啉用1 %三氯乙酸-乙腈溶液（3+7）提取，经HLB固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg ）；均质器（15000 r/min ）； 离心机 （5000 r/min ） ； 涡旋振荡器；氮吹仪；具塞塑料离心管（50 mL ），比色管（50 mL ）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI 源

样品的制备 、 保存与要求

1. 肌肉、肝脏、肾脏、鸡蛋、脂肪

取样品中又代表性的可食部分约500 g ，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下18 ℃ 冰箱内保存 。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品500 mL ，充分混匀，装入洁净容器中，密封，并标明 标记， 于4 ℃ 以下冷藏存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1. 提取

称取 试样约5 g （精确到0.01 g ）于50 mL 塑料离心管中，加入 20 mL 1 % 三氯乙酸 - 乙腈溶液（ 3+7 ），15000 r/min 均质提取 1 min ， 5000 r/min 离心5 min ，上清液转移至 50 mL 比色管中，残渣再用 20 mL 三氯乙酸 - 乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于比色管中，定容至刻度，混匀。提取液经滤纸过滤后待净化。

2. 净化

分取10 mL 提取滤液，于 45℃ 氮气吹至约3 mL ，加入 2 mL 正己烷，涡旋振荡 30 s ，5000 r/min 离心5 min ，弃去正己烷层，下层溶液以小于 2 mL/min 流速过 HLB 柱（ 6 cc/500 mg ， 6 mL 甲醇和 6 mL 水活化）， 3 mL 水洗涤样品管后上柱，再用 6 mL 水淋洗小柱，抽干 10 min ，以 6 mL 甲醇洗脱并收集，洗脱液在 45℃ 氮气吹干 ， 用1.0 mL 定容液（乙酸铵 - 乙腈溶液 4+6 ）溶解，过 0.2μm 滤膜后，供液相色谱- 质谱 / 质谱分析。

国标解读及注意事项

1. 盐酸氨丙啉 标准物质先用 水溶解，再用乙腈定容， 配成溶液浓度以氯丙啉计为100 μg/mL 的 标准 储备液 。

2.本方法使用1 %三氯乙酸-乙腈溶液提取目标化合物，正己烷除脂，HLB柱富集净化，稀释倍数=5，相当于1 g试料进行上机检测。3.提取液先用氮吹方法浓缩，乙腈挥发后，剩余水相用正己烷除脂后，再过柱净化。4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证富集的效果。

5. 本方法使用基质曲线进行定量分析， 根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品基质液。

参考文献

SN/T 4583-2016 出口动物源食品中氨丙啉残留量的测定 液相色谱- 质谱 / 质谱法

图1 动物源性食品中氨丙啉残留量测定的前处理流程图